Cellectis zal de eerste gegevens presenteren over nieuwe TALEN®-bewerkingsprocessen in hematopoëtische stam- en progenitorcellen (HSPC's) op de American Society of Gene and Cell Therapy (ASGCT) die van 7 tot 11 mei 2024 wordt gehouden. Posterpresentatie: Intron Editing van HSPC maakt lijnspecifieke expressie van therapeutica mogelijk: Gentherapie met behulp van bewerkte hematopoëtische en progenitor stamcellen (HSPC's) heeft het potentieel om een levenslange voorraad genetisch gecodeerde therapeutica te leveren. De meeste therapieën hebben te maken met de moeilijkheid om de bloed-hersenbarrière (BBB) te passeren.

De BBB is een continu endotheelmembraan dat, samen met pericyten en andere componenten van de neurovasculaire eenheid, de toegang van toxines, pathogenen, eiwitten en kleine moleculen tot de hersenen beperkt. Cellectis heeft een TALEN® gemedieerde promoter-loze intron editing-technologie ontwikkeld die de expressie van een therapeutisch transgen mogelijk maakt, uitsluitend door monocyten die afgeleid zijn van bewerkte HSPC's. De bewerkte cellen bevatten genetisch gecodeerde transgenen voor de hersenen. De bewerkte cellen die genetisch gecodeerde therapeutische eiwitten bevatten, kunnen de bloed-hersenbarrière passeren en de corresponderende therapeutische stof in de hersenen afscheiden.

Deze nieuwe bewerkingsbenadering is een belangrijke toevoeging aan de gereedschapskist voor het bewerken van HSPC-genen en zou nieuwe strategieën kunnen ontsluiten voor de behandeling van stofwisselingsziekten en neurologische aandoeningen. Onderzoeksgegevens toonden aan dat: Intron editing kan worden uitgevoerd binnen B-cel-, T-cel- en monocyt-specifieke endogene genen (respectievelijk CD20, CD4 en CD11b); Intron editing maakt expressie van transgenen op een afstammingsspecifieke manier mogelijk zonder duidelijke invloed op de expressie van het beoogde endogene gen; Editing van CD11b intron met behulp van een therapeutisch transgen dat codeert voor IDUA (het enzym dat ontbreekt bij Type-1 Mucopolysaccharidosis patiënten) maakt het mogelijk om de expressie van IDUA te beperken tot de myeloïde afstammingslijn; Bewerkte HSPC's enten zich efficiënt in het beenmerg van immunodeficiënte muizen en differentiëren in bewerkte myeloïde cellen die de BBB kunnen passeren en de hersenen kunnen bevolken. De intronbewerkingsstrategie die in dit werk beschreven wordt, is veelzijdig en kan mogelijk gebruikt worden om meerdere genetisch gecodeerde therapeutische eiwitten naar de hersenen te vectoriseren en zo meerdere metabolische en neurologische aandoeningen aan te pakken. Posterpresentatie: Circularisatie van niet-viraal enkelstrengs DNA-sjabloon voor gencorrectie en geninsertie verbetert het resultaat van bewerking in HSPC's: De meeste benaderingen voor het invoegen van genen die gebruikt worden om ex vivo HSPC's te bewerken, worden gehinderd door de lage efficiëntie van de toediening van DNA-sjablonen in hun kern.

Cellectis heeft een nieuw gen-editingproces ontwikkeld en geoptimaliseerd, dat gebruik maakt van de TALEN®-technologie en circulaire enkelstrengs DNA-sjabloonafgifte, waardoor een zeer efficiënte geninsertie in HSPC's mogelijk is. Onderzoeksgegevens toonden aan dat: Niet-virale enkelstrengs DNA-toediening in combinatie met de TALEN®-technologie geninsertie in langdurig repopulerende hematopoëtische stamcellen mogelijk maakt; Circularisatie van het enkelstrengs DNA de snelheid van geninsertie verder verhoogt zonder de cellulaire levensvatbaarheid en fitness van HSPC's te beïnvloeden, wat de ontwikkeling van de volgende generatie ex vivo celtherapieën vergemakkelijkt.